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多肽疫苗的生產(chǎn)工藝

1、NDV 的增殖與滅活　將保存的NDV 種毒用滅菌生理鹽水(內(nèi)含青霉素、慶大霉素) 按一定比例稀釋后,作用15～20min , 以每胚012ml 接種10 日齡的雞胚尿囊腔,37 ℃繼續(xù)孵化96h 后,活胚0～4 ℃冷卻6～10h , 無(wú)菌收取雞胚尿囊液裝入滅菌大瓶中,吸取混合后的尿囊液1ml , 檢測(cè)HA 效價(jià),同時(shí)將大瓶中尿囊液按012 % 的比例加入福爾馬林,于37 ℃滅活20～24h , 經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)合格后,放入低溫冰柜保存?zhèn)溆谩?/p>

2、AIV 的增殖與滅活　將保存的AIV 種毒按上述稀釋后,以每胚012ml 接種11 日齡雞胚, 37 ℃培養(yǎng)30h , 收獲培養(yǎng)后的死亡胚及存活胚的尿素液。吸取混合后的尿囊液檢測(cè)HA 效價(jià),同時(shí),將大瓶中尿囊液按013 % 比例加入福爾馬林, 于37 ℃滅活24h , 經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)合格者低溫冰柜保存?zhèn)溆谩?/p>

3、油相制備　取94 份7 號(hào)白油,6 份司本-80 混合后,以一定的比例加入硬脂酸鋁,然后加熱直到完全溶解制成油相備用。

4、水相制備取94 份7 號(hào)白油,6 份司本-80 混合后,以一定的比例加入硬脂酸鋁,然后加熱直到完全溶解制成油相備用。

 二聯(lián)油乳劑滅活苗的生產(chǎn)工藝：

1、將檢驗(yàn)合格的3種制苗用病毒液按一定比例混合，取96份混合病毒液與4份無(wú)菌吐溫80充分混合，使吐溫80完全溶解，制成內(nèi)部水相。

2、取少量白油與一定量的硬脂酸鋁混合，加熱熔化后再與適量司本80及白油混合均勻制成油相，并使白油、司本80和硬脂酸鋁的終濃度分別達(dá)到一定的比例；油相經(jīng)116 ℃高壓滅菌30 min后備用。

3、 取適量吐溫80、油酸和丙二醇充分混合，制得外部水相乳化劑，然后再與病毒液充分混合，制成外部水相。

采用二步乳化法制備疫苗。

第一步：按內(nèi)部水相與油相比為4∶6的比例，將內(nèi)部水相緩慢加入到低速攪拌的油相中，初步乳化后，高速乳化幾分鐘，制成W/O一級(jí)油乳劑疫苗；

第二步：按W/O一級(jí)油乳劑疫苗與外部水相的體積比為5∶1的比例，將W/O一級(jí)油乳劑疫苗加入到外部水相中，并按不同的乳化速度乳化疫苗，制成雞新城疫-傳染性支氣管炎-減蛋綜合征三聯(lián)復(fù)乳疫苗，檢查不同乳化速度制備疫苗的穩(wěn)定性。

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